酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, 簡寫 ELISA) 是我們平常實驗中經常會遇到的一種用于蛋白定量檢測方法。
目前我們用到的大多數是雙抗夾心 ELISA 方法。這篇文章主要是以這種 ELISA 為例，從 ELISA 試劑的選擇和注意事項等方面一一詳細介紹，
1. 試劑的選擇
a）根據試劑的檢測濃度范圍選擇
相同的指標不同類型的 ELISA 試劑檢測的靈敏度不一樣。
首先查閱幾篇相關文獻，對自己所檢測的指標的濃度范圍做到心中有數。這個指標的濃度不能低于試劑檢測濃度范圍的下限，這樣會造成測不出，沒有結果，這種情況下就要選擇超敏 ELISA 試劑，或者其他更敏感的檢測方法如化學發光檢測方法等，
如果濃度高于試劑檢測范圍的上限，樣本需要稀釋，具體稀釋倍數，做預實驗來決定，
b）根據樣本量和經費來選擇
目前 ELISA 試劑有預包被（已經包被好包被抗體的）成套試劑盒和沒有包被抗體的試劑（只提供包被抗體、檢測抗體和 HRP）。
國外幾家大的生物公司這兩種類型的試劑都提供，這兩種價格相差甚大，前者每個樣本的檢測成本接近后者的十倍，如果樣本量大和 / 或經費緊張，在符合 a) 條件的情況下，可以考慮選擇后者，同樣可以檢測出穩定的實驗結果。
2. 注意事項
a）熟悉實驗原理
任何實驗我們首先應該熟悉實驗原理，這是做出漂亮、可重復性的實驗結果的前提，即使實驗不成功，這也是我們分析失敗原因的根據，
例如雙抗夾心 ELISA 原理示意圖如下，根據這張示意圖我們知道，包被抗體和檢測抗體都是過量的，在整個實驗過程中有好幾次的洗滌過程，分別是為了去除過量的包被抗體和檢測抗體。
而最為關鍵的是最后一步的洗滌，如果殘留有未與抗原結合的酶標抗體，因其帶有能與底物反應的酶，那么這樣就會導致檢測結果偏高，因此最后一步的洗滌我們都會洗滌 5 次以上，做到充分洗滌，
雙抗夾心 ELISA 原理示意圖
b）底物 TMB 應分裝
對于需要自己包被抗體的試劑盒，顯色系統都需要我們自己準備，我們一般會購買 100ml / 瓶的 TMB，為了避免污染，我們會根據每次的實驗需要，先按需分裝出來。
c）標準曲線一定要做復孔
樣本的結果是根據標準曲線換算的，因此標準曲線直接影響整個樣本的結果。為了安全起見標準曲線一定要做復孔，
d）在加樣和試劑時槍頭一定要懸空，這樣能避免污染。
e）每次加樣和試劑都要保持勻速和按照同樣的順序，這樣能保證均一性，對最后的顯色和終止反應尤其重要。
讓絕大部分樣本的濃度范圍落在標準曲線的上升區間最佳，這樣檢測的結果穩定。
